វិធីសាស្រ្តស្រាវជ្រាវហ្សែនម៉ូលេគុល

ដើម្បីស្វែងយល់និងកំណត់អត្តសញ្ញាណនៅក្នុងរចនាសម្ព័ន្ធ DNA ជាវ៉ារ្យ៉ង់ត្រូវបានគេប្រើវិធីសាស្រ្តហ្សែនម៉ូលេគុល។ សម្រាប់តំបន់ DNA ជារៀងរាល់ដែលបង្ហាញពីតំបន់នៃក្រូម៉ូសូមហ្សែនឬ allele នេះ, វិធីសាស្រ្តនេះដែលខុសគ្នា។ វិធីសាស្រ្តហ្សែនគ្នាជាមូលដ្ឋានរួមមានម៉ូលេគុលមួយចំនួនឬការរៀបចំផ្សេងទៀតនៃ RNA និង DNA ។ វិធីសាស្រ្តទាំងអស់នេះត្រូវបានកំណត់លក្ខណៈដោយភាពស្មុគស្មាញយ៉ាងធំសម្បើមដោយគ្មានលក្ខខណ្ឌមន្ទីរពិសោធន៍មិនអាចត្រូវបានអនុវត្តនិងបុគ្គលិកដែលមានសមត្ថភាពខ្ពស់ត្រូវតែមាន។ ការងារនេះត្រូវបានអនុវត្តនៅក្នុងដំណាក់កាលជាច្រើន។

ដំណាក់កាល

ដំបូងគំរូ DNA ដែលទៅឬ RNA ត្រូវផលិត។ ខាងក្រោមនេះជាវិធីសាស្រ្តហ្សែនមួយដែលអាចត្រូវបានអនុវត្តម៉ូលេគុលដើម្បីស្ទើរតែសម្ភារៈណាមួយ: ការធ្លាក់ចុះនៃឈាម leukocytes មួយ fibroblasts វប្បធម៍, mucosa (scraped), សូម្បីតែឫសសក់, - DNA អាចត្រូវបានទទួលបានពីគំរូណាមួយ។ វាជាការសមរម្យដើម្បីប្រើប្រាស់វិធីសាស្រ្តហ្សែនណាមួយម៉ូលេគុលនិងជម្រើសជាច្រើនរបស់ពួកគេនិងបាន DNA ដែលត្រូវបានរក្សាទុកជាយូរមកហើយបែកបាក់គ្នាកក។ ដំណាក់កាលទីពីរត្រូវបានឧទ្ទិសដល់ការប្រមូលផ្តុំនៃបំណែកដែលចង់បាន (amplification) នៃ DNA នេះវាជាការជួយធានាខ្សែច្រវាក់ប្រតិកម្ម polymerase នៅក្នុង vitro (នៅក្នុង vitro ដោយគ្មានការចូលរួមនៃសារពាង្គកាយមានជីវិត) ។ ជាលទ្ធផលទម្រង់ដែលបានជ្រើសបំណែក DNA បានដោយប្រតិកម្មខ្សែសង្វាក់នេះនិងកើនឡើងចំនួនទឹកប្រាក់នៃ DNA ដងរាប់លាននាក់នេះ។

ជំហានទីបីនៅក្នុងវិធីសាស្រ្តស្រាវជ្រាវហ្សែនដែលត្រូវបានសន្មត់ថាការដាក់កម្រិតម៉ូលេគុល DNA ដែលបានគុណ (ការបែងចែកនេះហែកឬកាត់) ។ ការដាក់កម្រិតបានអនុវត្តដោយ electrophoresis នៅលើ polyacrylamide ឬជែល agarose ។ វិធីសាស្រ្តហ្សែននេះ-ម៉ូលេគុលនៃការសិក្សាបំណែក DNA ដែលអនុញ្ញាតឱ្យអ្នកគ្រប់គ្នាដើម្បីយកទីតាំងជាក់លាក់មួយនៅក្នុងការជែល។ បន្ទាប់ពីនោះមកជែលត្រូវបានព្យាបាលដោយសារធាតុប្រូ ethidium, សមត្ថភាពនៃការចងនឹង DNA, ការ irradiation ជាមួយពន្លឺ ultraviolet, បន្ទាប់មកវាគឺជាការដែលអាចធ្វើបានដើម្បីសង្កេតមើលផ្នែក luminescence ។ វិធីសាស្រ្តធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យហ្សែនម៉ូលេគុលគឺផ្លាស់ប្តូរនិងជាច្រើននោះទេប៉ុន្តែពីរជំហានដំបូងជារឿងធម្មតាទៅទាំងអស់។ ប៉ុន្តែនៅក្នុងគោលបំណងដើម្បីកំណត់អត្តសញ្ញាណបំណែក DNA ជាជែលដែលអាចត្រូវបាន colored, និងជាច្រើនវិធីសាស្រ្តដែលមានស្រាប់ផ្សេងទៀត។

ប្រភេទសត្វ

វិធីសាស្រ្តដោយផ្ទាល់និងទូទៅបំផុតសម្រាប់ការរកឃើញ mycobacteria វិធីសាស្រ្តដែលអាចរួមបញ្ចូលនៅខាងលើ DNA បានម៉ូលេគុលហ្សែនការរៀនសូត្រ។ សារៈសំខាន់របស់វាគឺថា, នៅក្នុងគោលបំណងដើម្បីកំណត់អត្តសញ្ញាណសម្ភារៈខ្សែសង្វាក់ស្កេនបំណែក DNA នៃជាក់លាក់ធាតុបង្កជំងឺ។ បច្ចេកទេសធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យហ្សែនម៉ូលេគុលមិនទាន់មានប្រសិទ្ធភាពបន្ថែមទៀតជាវិធីមួយក្នុងការទទួលស្គាល់ដូចជាជំងឺរបេងជំងឺ។ ដោយប្រើខ្សែច្រវាក់ប្រតិកម្ម polymerase (PCR), អ្នកអាចប្រាកដថានឹងបង្កើនដើម DNA បានច្បាប់ចម្លងដែលបានចំនួនមួយលានដងក្នុងគឺថានឹងមានការបំភ្លឺលម្អិតហើយវានឹងបង្ហាញលទ្ធផល។ កម្រិតនៃភាពប្រែប្រួលនេះគឺមានខ្ពស់ - ច្រើនជាងកៅសិបប្រាំភាគរយដែលជាផលប្រយោជន៍សំខាន់នៃវិធីសាស្រ្តនេះ។

នៅសល់នៃវិធីសាស្រ្តម៉ូលេគុល-ហ្សែននៃការស្រាវជ្រាវទៅលើប្រសិទ្ធភាពនៃទិន្នផលច្បាប់ចម្លងច្រើនព្យញ្ជនៈកើនឡើងទ្វេដងចាប់តាំងពីនៅក្នុងករណីនេះគំរូព្រាងបង្ហាញលំដាប់ oligonucleotide ជាក់លាក់មួយរយកើនឡើងដល់ទៅប្រាំមួយដងហើយ។ សូម្បីតែការធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យនៃជំងឺរបេងនៃវប្បធប្រព័ន្ធផ្លូវដង្ហើមយ៉ាងខ្លាំងបន្ថយភាពប្រែប្រួលរបស់ខ្លួន។ នេះគឺជាមូលហេតុឱសថសម័យទំនើបត្រូវបានផ្អែកលើវិធីសាស្រ្តហ្សែនម៉ូលេគុលនៃការធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យនៃជំងឺរបេង។ វិធីសាស្រ្តមួយដែលបានរៀបរាប់គឺមានប្រសិទ្ធិភាពជាពិសេសនៅពេលដែលការដោះស្រាយជាមួយធាតុបង្កជំងឺនៃការប្រែប្រួល antigens ខ្ពស់, កំណត់វិធីផ្សេងទៀតដែលជាកាន់តែពិបាក - តម្រូវឱ្យមានការពិសេស ប្រព័ន្ធផ្សព្វផ្សាយរបស់សរធាតុចិញ្ចឹម និងការដាំដុះរយៈពេលវែង។ វិធីសាស្រ្តហ្សែននិងម៉ូលេគុលផលិតគីមីជីវៈមានប្រសិទ្ធិភាពខុសគ្នាខ្លាំងណាស់នៅលើលទ្ធផល។

ការធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យនៃជំងឺរបេង

ការធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យនៃជំងឺរបេងលោក Marshall PCR ជាទូទៅប្រើស្វីតភាគច្រើនអ្នកដែលដែលមាន DNA បានជាក់លាក់សម្រាប់គ្រប់បួនប្រភេទនៃជំងឺនេះ។ ដើម្បីសម្រេចបាននូវគោលដៅនេះជាញឹកញាប់ប្រើ primers ដែលរកឃើញលំដាប់ជាធាតុ (IS-986, IS-6110) ដែលជាប្រភេទសត្វធាតុទាំងនេះលក្ខណៈជំងឺរបេង Mycobacterium ខ្ពស់ម្លាស់និងតែងតែមានវត្តមានច្រើននៅក្នុងច្បាប់ចម្លងហ្សែនេះ។ ទាញយក DNA អាចផងដែរត្រូវបានអនុវត្តពីប្រទេសបរិសុទ្ធនិងការព្យាបាល (កំហាករបស់អ្នកជំងឺ) ដោយវិធីសាស្រ្តសមរម្យណាមួយផ្សេងទៀត។ ឧទាហរណ៍មានវិធីសាស្រ្តក្នុងការរីកចំរើនដែលជាកន្លែងដែលសតិបណ្ដោះអាសន្ន lysis គឺត្រូវបានប្រើដោយផ្អែកលើ thiocyanate guanidine និងសុីលីកាដែលជា DNA របស់នាវានេះ។ ចំនួននៃអ្នកជំងឺដែលខុស bacteriological ក្រីក្រកើនឡើងជារៀងរាល់ឆ្នាំហើយដូច្នេះនៅក្នុងការអនុវត្តវេជ្ជសាស្រ្តបានបង្កើតកម្រិតខុសគ្នាទាំងស្រុងនៃអង្គការ: វិធីសាស្រ្តម៉ូលេគុល-ពន្ធុនៃ DNA ដែលត្រូវបានគេសិក្សាតួនាទីសំខាន់ក្នុងការធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យនេះ។

ទោះជាយ៉ាងណាយើងត្រូវតែទទួលស្គាល់ថាវាមិនមែនដោយគ្មានគុណវិបត្តិ។ វិធីសាស្ត្រគឺប្រើ PCR ជាញឹកញាប់នាំមកនូវការមួយចំនួនធំនៃលទ្ធផលមិនពិតវិជ្ជមាននិងហេតុផលគឺមិនមានកំហុសបច្ចេកទេសតែប៉ុណ្ណោះទេប៉ុន្តែថែមទាំងជាលក្ខណៈពិសេសនៃវិធីសាស្រ្តខ្លួនវាបាន។ លើសពីនេះទៀតការប្រើប្រាស់វិធីសាស្រ្តនៃការធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យនេះដើម្បីកំណត់លទ្ធភាពជោគជ័យនៃ mycobacteria ដែលត្រូវបានគេស្គាល់អត្តសញ្ញាណនោះទេវាមិនអាចទៅរួចទេជាធម្មតា។ ប៉ុន្តែគុណវិបត្តិនេះគឺមិនមែនជាការសំខាន់បំផុត។ វិធីសាស្រ្តហ្សែនម៉ូលេគុលនៃការវិនិច្ឆ័យ PCR entail ហានិភ័យនៃការចម្លងរោគនៃ DNA mycobacterial នេះ។ តម្រូវការវិញ្ញាបនប័ត្រសម្រាប់ហេតុផលនេះថាសម្រាប់មន្ទីរពិសោធន៍ PCR បានរចនាឡើងទាំងស្រុងការលំបាកដែលពួកគេបានទាមទារអោយមានបរិវេណបីដាច់ដោយឡែក។ បច្ចេកវិទ្យា PCR ទំនើបនិងស្មុគស្មាញនេះគឺខ្លាំងណាស់, វាតម្រូវឱ្យមានការប្រើប្រាស់ឧបករណ៍សមស្របនិងបុគ្គលិកទទួលការបណ្តុះបណ្តាលខ្ពស់នេះ។

bacterioscopy

នៅពេលដែលលទ្ធផលធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យនៃការវិភាគនេះត្រូវតែត្រូវបានបើប្រៀបធៀបជាមួយនឹងទិន្នន័យផ្សេងទៀត: ការពិនិត្យព្យាបាល, radiography, អតិសុខុមទស្សន៍លាបដំណាំនិងសូម្បីតែការឆ្លើយតបទៅនឹងការព្យាបាលជាក់លាក់មួយគឺមានសារៈសំខាន់ខ្លាំងណាស់។ នៅក្នុងស៊េរីនេះ, ការសិក្សា PCR គឺគ្រាន់តែជាផ្នែកមួយនៃសមាសភាគ។ រកឃើញធាតុបង្កជំងឺនេះក្នុងការធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យដើមអាចជាវិធីសាស្រ្តសាមញ្ញបំផុតនិងលឿនបំផុត - bacteriological ។

មានត្រូវបានប្រើមីក្រូទស្សន៍ពន្លឺ (coloring Ziehl-Neelsen) និង fluorescent (fluorochromes COLOR) ។ អត្ថប្រយោជន៍នោះគឺល្បឿនលាបលទ្ធផល។ ប៉ុន្តែគុណវិបត្តិរបស់វាត្រូវបានចាត់ទុកថាជាការត្រឹមត្រូវសមត្ថភាពនៅមានកម្រិតដោយសារការប្រែលប្រួលនេះទាប។ ទោះជាយ៉ាងណាវិធីសាស្រ្តនេះត្រូវបានផ្ដល់អនុសាសន៍អង្គការសុខភាពពិភពលោកដែលជាសន្សំសំចៃបំផុតនិងដីដើម្បីរកឱ្យឃើញអ្នកជំងឺរបេង។ ការរកឃើញនៃវិធីសាស្រ្ត bacteriological mycobacteria មានតម្លៃការព្យាករណ៍និងការប៉ាន់ស្មានការបញ្ចេញបាក់តេរីបរិមាណ។ ទំនុកចិត្តកាន់តែច្រើនទៅច្រើនជាមួយវាម៉ូលេគុលដោះស្រាយវិធីសាស្រ្តស្រាវជ្រាវហ្សែននៃជំងឺរបេង។

វប្បធម៍

ការរកឃើញល្អប្រសើរជាងមុននៃការទទួលស្គាល់ការសិក្សាវប្បធម៍ mycobacteria ។ សាបព្រួសសម្ភារៈ pathological ត្រូវបានធ្វើឡើងចូលទៅក្នុងវាមធ្យមស៊ុត: Mordovsky, Finn ទី II, LJ, និងដូច។ គោលការណ៍នៃភាពធន់ទ្រាំទៅនឹងថ្នាំរបស់ mycobacteria និងភស្តុតាងដោយប្រយោលនៃប្រសិទ្ធភាពនៃចំនួននៃ mycobacteria មួយនិងអាណានិគមរបស់ពួកគេនៅក្នុង vitro ប្រសិនបើវិធីសាស្រ្តអនុវត្តនៃវប្បធម៍ស្រាវជ្រាវ។ ដើម្បីបង្កើនភាគរយនៃភាពឯកោនៃការ inoculation mycobacteria នៃសម្ភារៈត្រូវបានប្រារព្ធឡើងនៅលើ pathological បរិស្ថានច្រើន។

ការជួបតម្រូវការនៃវប្បធម៍ធាតុបង្កជំងឺរួមទាំងជំនួយឥតសំណងនិងសារធាតុរាវច្រើន។ ត្រូវបានប្រើនៅក្នុងប្រព័ន្ធនេះនិងប្រភេទដោយស្វ័យប្រវត្តិកំណើន VANTES ម៉ែត្រ។ ដំណាំត្រូវតែត្រូវបានធ្វើឡើងនៅក្នុង incubation សម្រាប់រហូតដល់ទៅប្រាំពីរទៅប្រាំបីសប្តាហ៍។ ដោយពេលនេះដំណាំកង្វះនៃកំណើននេះអាចត្រូវបានចាត់ទុកអវិជ្ជមាន។ វិធីមានប្រសិទ្ធិភាពបំផុតដើម្បីរកឃើញជំងឺរបេង Mycobacterium ពិចារណាគំរូជីវសាស្រ្ត: ជ្រូកហ្គីណេឆ្លងមេរោគសម្ភារៈធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យដែលមានជំងឺរបេងយ៉ាងខ្លាំងងាយនឹង។

តួលេខមួយចំនួន

វាលគួរឱ្យចាប់អារម្មណ៍នៃការសិក្សាដែលត្រូវបានបើកដោយការវិនិច្ឆ័យ PCR គឺដើម្បីសិក្សាពីជំងឺរបេងអិម - ឆ្លងមេរោគមិនទាន់ឃើញច្បាស់។ គំនិតសម័យទំនើបនៃការឆ្លងមេរោគរបេងបានបង្ហាញថាចេញពីមួយរយនាក់ដែលមាននៅក្នុងការទំនាក់ទំនងជាមួយអិមរបេងកៅសិបអាចនឹងត្រូវបានឆ្លងមេរោគនោះទេប៉ុន្តែបានតែដប់នៃពួកគេគឺជាអ្នកជំងឺសកម្មត្រូវបានត្រូវបានបង្កើត។ អ្នកផ្សេងទៀតមានភាពស៊ាំជំងឺរបេងហើយដោយសារតែកៅសិបភាគរយនៃករណីឆ្លងមេរោគនេះនៅតែមិនទាន់ឃើញច្បាស់។ រកឃើញលំនាំមួយវាបានជួយវិធីសាស្រ្តហ្សែនមួយម៉ូលេគុល។

អ្នកឯកទេសខាងហ្សែនបាននិយាយថាហាសិបប្រាំភាគរយនៃអ្នកដែលត្រូវបានគេដំណាំ pathological សម្ភារៈអវិជ្ជមាននិងប៉ែតសិបភាគរយនៃមនុស្សដែលបានឆ្លងមេរោគអិមរបេងប៉ុន្តែហូរដោយគ្មានការសម្ដែងអ្នកថតនៃជំងឺឆ្លើយតបជាវិជ្ជមាន PCR បានទទួល។ វាគឺជាវិធីសាស្ត្រមួយដែលមានហ្សែនជួយធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យដើម្បីកំណត់ពីអ្នកជំងឺដែលមានហានិភ័យដោយការសិក្សា PCR, ជាមួយនឹងលទ្ធផលនៃការវិភាគរបស់ពួកគេ (អតិសុខុមទស្សន៍និងវប្បធម៍) ត្រូវបានអវិជ្ជមាននិងការឆ្លងមេរោគ subclinical មានវត្តមានអិមជំងឺរបេង។

ការស្រាវជ្រាវទំនើប

សហព័ន្ធរុស្ស៊ីនិងមន្ទីរពិសោធន៍ bacteriological ប្រើវិធីសាស្រ្តឆាប់រហ័សនៃការប្រមូលផ្តុំដាច់ខាត: សកម្មភាព reductase នីត្រាតនៃ mycobacteria សាកល្បងដោយការ reagents Griess ។ មជ្ឈមណ្ឌលប្រឆាំងការជំងឺរបេងប្រើវិធីសាស្រ្តមួយដែលអនុញ្ញាតឱ្យដើម្បីកំណត់ភាពធន់នឹងថ្នាំ។ ការបណ្ដុះនេះនៅក្នុងប្រព័ន្ធផ្សព្វផ្សាយរាវ, ដែលជាកន្លែងដែលដោយស្វ័យប្រវត្តិ radiometric fluorescent និងប្រព័ន្ធគណនេយ្យរបស់ mycobacteria កំណើន។ បែបវិភាគមួយត្រូវបានធ្វើយ៉ាងឆាប់រហ័ស - រហូតដល់ពីរសប្តាហ៍។

បច្ចុប្បន្ននេះវិធីសាស្រ្តថ្មីកំពុងត្រូវបានបង្កើត: ការតស៊ូថ្នាំនៃ mycobacteria ត្រូវបានវាស់នៅកម្រិត genotype នេះ។ សិក្សាពីយន្តការម៉ូលេគុលនៃហ្សែនធន់ទ្រាំនិងការបង្ហាញវត្តមាននៅក្នុង mycobacteria នេះ។ ហ្សែនទាំងនេះត្រូវបានផ្សារភ្ជាប់ជាមួយនឹងការស៊ាំទៅនឹងថ្នាំមួយចំនួន។ ឧទាហរណ៍ហ្សែន kasA, Inha, katG ធន់ទ្រាំទៅនឹងើ Isoniazid, ហ្សែន rpoB - ហ្សែន RNA 16Sp Rifampicin និង rpsL - ការើថាំនះ, emb1 - ដើម្បី Ethambutol រយៈពល, gyrA - fluoroquinolone មួយហើយដូច្នេះនៅលើ។

ការផ្លាស់ប្តូរ

ការធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យកើនឡើងយ៉ាងខ្លាំងវិធីសាស្រ្តសម័យទំនើបនេះម៉ូលេគុល-កម្រិតហ្សែនសម្រាប់ការសិក្សា DNA និងត្រូវបានអនុញ្ញាតឱ្យធ្វើការសិក្សាទ្រង់ទ្រាយធំនៃការផ្លាស់ប្តូរនៅក្នុងវិសាលគមរបស់ពួកគេ។ ឥឡូវនេះយើងដឹងថាការផ្លាស់ប្តូរទូទៅបំផុតក្នុង 516, 526 និង 531 ការ cordon ហ្សែន rpoB នេះហើយបានកំណត់ស៊ាំទៅនឹងថ្នាំជាច្រើន។ មានជួរទាំងមូលនៃវិធីសាស្រ្តសម្រាប់ការវាយអក្សរដោយប្រើប្រាស់វិធីសាស្រ្តនៃការ mycobacteria ប្រពៃណីមិនត្រឹមតែគឺ - គីមីជីវៈ, ជីវសាស្រ្តនិងវប្បធម៍ប៉ុណ្ណោះទេប៉ុន្តែគេប្រើយ៉ាងទូលំទូលាយបច្ចេកទេសហ្សែនម៉ូលេគុលសម័យទំនើប។ រួចទៅហើយមានគ្រប់គ្រាន់និងផ្តល់នូវវិធីសាស្រ្តក្នុងការធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យត្រឹមត្រូវសម្រាប់ការរកឃើញនៃជំងឺ monogenic នេះ។ ពួកគេត្រូវបានផ្អែកលើការសិក្សា DNA នៅក្នុងតំបន់ជាក់លាក់នៃហ្សែនជាក់លាក់មួយ។ នេះគឺជាធម្មតាដំណើរការស្មុគស្មាញមួយពេលវេលាប្រើប្រាស់និងមានតម្លៃថ្លៃប៉ុន្តែទិន្នន័យដែលត្រូវបានផ្តល់ឱ្យដោយការវិភាគហ្សែនម៉ូលេគុលជាច្រើនទៀតមានភាពត្រឹមត្រូវនិងជូនដំណឹងជាងផ្សេងទៀតវិភាគទិន្នន័យទាំងអស់។

វាត្រូវបានគេបានគេស្គាល់ថា DNA ដែលមិនផ្លាស់ប្តូរសម្រាប់ជីវិតទាំងមូលរបស់សារពាង្គកាយនោះដែលវាស្ថិតនៅក្នុង odnakova កោសិកា nucleation ណាមួយឡើយហើយនេះធ្វើឱ្យវាអាចធ្វើទៅបានដើម្បីទទួលយកការវិភាគនៃការពិតកោសិកាទាំងអស់នៃរាងកាយ, នៅក្នុងដំណាក់កាលនៃការ ontogeny ណាមួយ។ ការខូចខាតអាចហ្សែនបានរកឃើញមុនពេលរូបរាងត្រូវនៃរោគសញ្ញាដំបូងដែលបានទៅជាជំងឺព្យាបាលទ្រង់ទ្រាយពេញលេញផងដែរដូចជានៅក្នុងមនុស្សដែលមានសុខភាពល្អ heterozygous នោះទេប៉ុន្តែមានការផ្លាស់ប្តូរហ្សែនដែលមាននៅ។ វិធីសាស្រ្តធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យជំងឺតំណពូជហ្សែនម៉ូលេគុលអនុញ្ញាតឱ្យបង្ហាញ (វិធីសាស្រ្តដោយផ្ទាល់ DNA ជាការវិភាគ) របស់ខ្លួនព្រមទាំងដើម្បីវិភាគដោយឡែកនៃជំងឺនេះនៅក្នុងគ្រួសារជាមួយនឹង DNA ទីតាំងសញ្ញាសម្គាល់ (ពហុសណ្ឋានហ្សែន) ដែលត្រូវបានផ្សារភ្ជាប់យ៉ាងជិតស្និទ្ធជាមួយនឹងហ្សែនរងការខូចខាត (ពោលគឺជាវិធីសាស្រ្តដោយប្រយោលនៃ DNA វិនិច្ឆ័យ) នេះ។ ផ្ទាល់ឬដោយប្រយោល - ការវិនិច្ឆ័យឌីអិនអេណាមួយគឺផ្អែកលើវិធីសាស្រ្តនៃការកំណត់អត្តសញ្ញាណមួយផ្នែកដែលបានកំណត់យ៉ាងតឹងរឹងនៃ DNA មនុស្ស។

វិធីសាស្រ្តដោយផ្ទាល់

វិធីសាស្រ្តដោយផ្ទាល់នៃការធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យ DNA បាននៅពេលដែលជំងឺតំណពូជហ្សែនដែលជាពិរុទ្ធជនត្រូវបានគេស្គាល់ថាជាបានគេស្គាល់ផងដែរ, និងប្រភេទនៃការផ្លាស់ប្តូររបស់ខ្លួន។ ឧទាហរណ៍វិធីសាស្រ្តដោយផ្ទាល់សមរម្យនៅក្នុងចំនួននៃជំងឺមួយ។ នេះ chorea នៅ Huntington បាន (ផ្នែកបន្ថែម CTG-ម្តងទៀត), phenylketonuria (R408W), ជំងឺ cystic fibrosis (delF508, ការផ្លាស់ប្តូរធំ) និងដូចជា។ អត្ថប្រយោជន៍សំខាន់នៃវិធីសាស្រ្តដោយផ្ទាល់គឺជាភាពត្រឹមត្រូវធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យកម្មសិទ្ធិទាំងស្រុងនិងមានតម្រូវការក្នុងការធ្វើវិភាគ DNA នៃការសល់របស់ក្រុមគ្រួសារនោះទេ។ ប្រសិនបើមានការផ្លាស់ប្តូរហ្សែនដែលត្រូវគ្នាក្នុងមួយត្រូវបានរកឃើញ, វាអនុញ្ញាតឱ្យយ៉ាងច្បាស់អនុម័តការធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យនៃតំណពូជ, ការប្តេជ្ញាចិត្ត genotype មួយសម្រាប់នៅសល់របស់ក្រុមគ្រួសារបន្ទុកនេះ។

អត្ថប្រយោជន៍មួយទៀតនៃការធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យដោយផ្ទាល់ត្រូវបានចាត់ទុកដើម្បីកំណត់អត្តសញ្ញាណជាមួយក្រុមហ៊ុនអាកាសចរណ៍ heterozygous បម្រែបម្រួលហ្សែនអាក្រក់ពីសាច់ញាតិនិងឪពុកម្តាយដែលបានស្លាប់ដោយសារជំងឺនេះ។ នេះគឺជាការពិតជាពិសេសសម្រាប់ជំងឺ autosomal វិបត្តិសេដ្ឋកិច្ច។ គុណវិបត្តិនៃវិធីសាស្រ្តដោយផ្ទាល់ផងដែរដែលអាចរកបាន។ ដើម្បីអនុវត្តពួកវាអ្នកត្រូវតែដឹងឱ្យច្បាស់ហ្សែនមិនប្រក្រតីក្នុង្ររចនាសម្ព័ន្ធ exon-intron នៃវិសាលគមនិងការផ្លាស់ប្តូររបស់ខ្លួន។ មិនមែនទាំងអស់នាពេលបច្ចុប្បន្ននេះជំងឺ monogenic បានទទួលព័តមានដូចនេះ។ វិធីសាស្រ្តដោយផ្ទាល់ក្រៅផ្លូវការដែលមិនអាចត្រូវបានចាត់ទុកពេញលេញនោះទេព្រោះហ្សែនដូចគ្នាមួយនិងអាចមានមួយចំនួនធំនៃការផ្លាស់ប្តូរ pathological ដែលបណ្តាលការអភិវឌ្ឍនៃជំងឺតំណពូជ។

វិធីសាស្រ្តប្រយោល

វិធីសាស្រ្តដោយប្រយោលក្នុងការវិនិច្ឆ័ DNA ដែលត្រូវបានប្រើនៅពេលទាំងអស់នៅក្នុងករណីផ្សេងទៀត, បើហ្សែនរងការខូចខាតមិនត្រូវបានស្គាល់អត្តសញ្ញាណទេប៉ុន្តែមានតែក្រូម៉ូសូមឬប្រសិនបើការធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យបន្ទាត់នេះមិនបានផ្តល់លទ្ធផល (វាកើតឡើងប្រសិនបើមានហ្សែនអង្គការម៉ូលេគុលស្មុគស្មាញឬវិសាលភាពធំមួយ, ប្រសិនបើមានច្រើន ការផ្លាស់ប្តូរ pathological) ។ វិធីសាស្រ្តប្រយោលបានសម្តែងការវិភាគដោយឡែកនៃសញ្ញាសម្គាល់នៅក្នុងក្រុមគ្រួសារ alleles ពហុសណ្ឋាន។ សញ្ញាសម្គាល់បានរកឃើញនៅតំបន់ក្រូម៉ូសូមដូចគ្នាឬស្ថានរេខាណិតត្រូវបានភ្ជាប់យ៉ាងជិតស្និទ្ធទៅនឹងជំងឺនិងតំណាងឱ្យការលុបឬបញ្ចូល, ជំនួសចំណុចម្តងទៀត, ពហុសណ្ឋានរបស់ខ្លួននិងដោយសារការចំនួនទឹកប្រាក់គឺមានភាពខុសគ្នានៃកោសិកានៅក្នុងប្លុក។

ងាយស្រួលបំផុតសម្រាប់ការធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យនិងការ minisatellite ចាត់ទុក microsatellite ពហុសណ្ឋានដោយប្រយោលដែលត្រូវបានចែកចាយយ៉ាងទូលំទូលាយក្នុងបណ្ដុំពន្ធុមនុស្ស។ តម្លៃរបស់ពួកគេបានសម្តែងនៅក្នុងមាតិកាពខ្ពស់ប្រសិនបើមានការខូចខាតទៅនឹងហ្សែនរវាងសញ្ញាសម្គាល់ចម្ងាយនិងហ្សែនគឺមិនធំពេក។ ក្នុងករណីចុងក្រោយនេះភាពត្រឹមត្រូវប៉ាន់ស្មានគឺត្រូវបានកំណត់ទៅវិសាលភាពធំមួយញឹកញាប់នៃការសមាយោគឡើងវិញរវាងពហុសណ្ឋាននិងការខូចខាតសញ្ញាសម្គាល់។ វិធីសាស្រ្តធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យដោយប្រយោលផងដែរថាការផ្តល់នូវជំហានដំបូងដែលចាំបាច់នៃប្រេកង់ allele នៃការស្រាវជ្រាវបានវិភាគក្នុងចំណោមអ្នកជំងឺនិងនាវានៃការផ្លាស់ប្តូរ, បូកចាំបាច់នៃការកំណត់ប្រូបាប៊ីលីតេនៃការសមាយោគឡើងវិញនៃ nonequilibrium និងការ adhesion សញ្ញាសម្គាល់និង alleles ជំងឺនេះ។

វិធីសាស្រ្តផ្សេងទៀត

ផ្នែកនៃ RNA ឬខ្លី DNA ដែលដូចហ្សែនមួយអាចមើលឃើញនៅក្រោមមីក្រូទស្សន៍ការសិក្សាមិនអាចមានដូច្នេះការផ្លាស់ប្តូរដើម្បីកំណត់អត្តសញ្ញាណហ្សែនធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យត្រូវការដោយម៉ូលេគុល។ មានមួយថា: «គម្រោងបណ្ដុំពន្ធុមនុស្ស "ព្រមទាំងបុផ្សេងទៀតនៅក្នុងអណូពន្ធុវិទ្យាគឺជាការពង្រីកយ៉ាងខ្លាំងពីលទ្ធភាពនៃការធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យនៃជំងឺតំណពូជនេះ - ទាំងពីរមុននិង postnatal ។ វិធីសាស្រ្តទាំងនេះអាចផ្តល់នូវការរកឃើញដំបូងនិងធ្វើឱ្យ poly- ព្យាករនិងជំងឺ monogenic ដែលមានជាលើកដំបូងកើតឡើងនៅក្នុងមនុស្សពេញវ័យ។ ជាអកុសលដោយសារតែសមត្ថភាពបច្ចេកទេសនៃការសិក្សាអណូពន្ធុវិទ្យាមានពេលខ្លះលើសពីដែនកំណត់វិជ្ជាជីវៈដែលត្រូវបានកំណត់នៅក្នុងការទាក់ទងទៅនឹងមរតកជាពិសេសនៅពេលដែលការធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យគឺស្ថិតនៅក្នុងវ័យជំទង់និងវ័យកុមារភាព។

រចនាសម្ព័ន្ធនិងលេខមិនប្រក្រតីក្រូម៉ូសូមគឺជាមូលហេតុទូទៅបំផុតនៃជំងឺនិងមហារីក, និងការខូចជាច្រើន។ aberrations បានក្រូម៉ូសូមត្រូវការដើម្បីត្រូវបានកំណត់ដែលជាការសំខាន់សម្រាប់ការប្រឹក្សាយោបល់ក្រុមគ្រួសារ - ដើម្បីវាយតម្លៃពីការព្យាកររួមជាមួយហានិភ័យសុខភាពបន្តពូជក្នុងការមានផ្ទៃពោះនាពេលអនាគត។ ការវិភាគក្រូម៉ូសូមគឺជា "ស្តង់ដាមាស" នៃការធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យហ្សែននោះទេប៉ុន្តែវាត្រូវបានកំណត់។ មានតែវិធីសាស្រ្តនៃ ការវិភាគហ្សែនម៉ូលេគុល អាចធ្វើបានកាន់តែច្រើនដោយសារតែមានមូលដ្ឋាននៅបានប្រើក្លូនបច្ចេកវិទ្យាដែលមានសមត្ថភាពស្លាក fluorescent ភាពប្រែប្រួលខ្ពស់របស់ពួកគេដើម្បីកំណត់អត្តសញ្ញាណការផ្លាស់ប្តូរក្រូម៉ូសូមច្បាស់ដែលជាមិនអាចទៅរួចនោះទេក្នុងការរកឃើញបុរាណ ការសិក្សា cytogenetic ។ បច្ចេកទេសទាំងនេះត្រូវបានកាន់តែខ្លាំងឡើងការពង្រីកសមត្ថភាពក្នុងការធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យរបស់យើង, នៅពេលដែលបានពិនិត្យលើកុមារពិការអភិវឌ្ឍជំងឺវិកលចរិតដោយមានជំងឺតំណពូជច្រើនផ្សេងទៀត។

ការរកឃើញ

វាមានសារៈសំខាន់ខ្លាំងណាស់សម្រាប់មនុស្សជាតិត្រូវបានគេរចនាសម្ព័ន្ធហ្សែននិងមុខងារនៃចំនេះដឹង, ប្រភេទនៃការប្រែប្រួល, សមត្ថភាពក្នុងការរកឃើញជំងឺតំណពូជដែលបានកើតឡើងនៅក្នុងការតភ្ជាប់ជាមួយនឹងការអភិវឌ្ឍនៃអណូពន្ធុវិទ្យា។ វិធីសាស្រ្តរបស់ខ្លួនមានគោលបំណងសិក្សានៃម៉ូលេគុល DNA ដែល - ហើយនៅពេលដែលវាជាការធម្មតាហើយនៅពេលដែលវាត្រូវបានខូច។ ការត្រៀមរៀបចំនៃលំដាប់នៃ nucleotides ទឹកអាស៊ីតស្ទះ (DNA) បានពង្រីកនៅដំណាក់កាលពីការទទួលបានគំរូដើម្បីកំណត់អត្តសញ្ញាណបំណែកបុគ្គល។ ភាពឯកោនៃ DNA បណ្ដុំពន្ធុពីកោសិកា, ការដាក់កម្រិត (ការរហែក) ការបំភ្លឺលម្អិត (ក្លូន) electrophoresis នៃបំណែកនេះ (បំបែកបន្ទុកអគ្គិសនីរបស់ពួកគេនិងទម្ងន់ម៉ូលេគុលដោយជែល agarose) ។ អត្តសញ្ញាណនៃទីតាំងស្ថិតនៅលើបំណែកជាក់លាក់នៃឆ្នូតផ្ទៃដាច់ពីគ្នានេះ។

បន្ទាប់មកទទួលបានការចូលទៅក្នុងតម្រងពិសេសទង្វើដែលតាមរយៈឆ្លងកាត់បំណែកគ្នាជាមួយនឹងបង្កាត់បំណែក DNA ជាក្លូនឬការស៊ើបអង្កេតវិទ្យុសកម្មសំយោគគឺបញ្ជាមួយដែលនឹងស្មើទៅនឹងគំរូការធ្វើតេស្តគ្នា។ ប្រសិនបើអ្នកបានផ្លាស់ប្តូរទីតាំងឬប្រវែងនេះបើប្រៀបធៀបនឹងការស៊ើបអង្កេតប្រសិនបើជាបំណែកថ្មីឬបាត់ខ្លួន - ទាំងអស់នេះបង្ហាញថាហ្សែនវិភាគបានទទួលការរៀបចំរចនាសម្ព័ន្ធក្នុងលំដាប់ nucleotides នេះ។ មានបច្ចេកទេសជាមូលដ្ឋានចំនួនប្រាំបីនៃការសិក្សាហ្សែនម៉ូលេគុលគឺ: លំដាប់លំដោយ (ការប្តេជ្ញាចិត្តនៃលំដាប់ DNA ជា) ប្រតិកម្មខ្សែសង្វាក់ polymerase (កើនឡើងនៅក្នុងចំនួននៃលំដាប់នេះ), ការរៀបចំរបស់ primer បានគេស្គាល់ថាហ្សែននេះក្លូនឌីអិនអេផលិតកម្មនៃម៉ូលេគុល recombinant ចេញមកប្រូតេអ៊ីនដោយសារការម៉ូលេគុល recombinant ដោយបង្កើតសំណុំពេញលេញមួយ (ការប្រមូលផ្តុំ បណ្ណាល័យ) ក្លូនបំណែកដែលត្រូវបានទទួលបានដោយការប្រើការដាក់កម្រិត។